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如何完善ELISA试剂盒实验中的过失

ELISA操作步骤多,新手操作难免会有过失。而这些过失很多是由细节不够好造成的,减少过失的方法有很多,比如做实验时少说话,防止唾液掉进酶标条中。当然,大家还要学会自己发掘问题,找出原因。那么我们要如何完善ELISA试剂盒实验中的过失? 
    ①:评估试剂的实用性,试剂的稳定与否,对准确率的高低到头重要。在试剂启用前,应进行阴、阳对照及样品反复比照试验,判定试剂符合要求后方可使用。
    ②:操作前仔细阅读说明书,严格按照说明书要求进行规范化操作。不同批号的试剂不可混用。值得改进的地方,反复试验确定成立后才能改进,比如洗板次数的掌握等。
    ③:加样要准确、快速。加样不准确,酶生成物的量不能确定,直接影响显色结果。另外,显色的深浅及A值的测定与加入显色剂和终止液的量有关,所以加样应慎重。要求在一定时间内加样完毕的实验,如果加样迟缓,便出现误差,而且试剂长时间暴露在外,尤其室温过高时,保存期会缩短甚至失效。

    ④:检验技师应具备从事实验室操作的基本素质和实践经验。能熟练操作实验仪器、器械,具有一定总结和分析问题的能力,对实验中出现的意外情况能及时妥善解决。
    ⑤:使用校对过的微量移液器,排除自然误差。移液器准确与否对定量检测尤为重要。
    ⑥:严格掌握显色时间,显色时间过短,加入终止液反应终止后,底物结合物的量过少,易出现假阴性。超过显色要求时间后显色,应判为假阳性,这可能与试剂本身有关。加显色剂后立即显色,不可报阳性,这可能是本底显色的结果。
    ⑦:洗涤彻底,洗板不彻底,酶结合物本底显色会呈现假阳性。另外,洗涤液要新鲜,现用现配,陈旧的洗涤液会出现本底增高现象,也可能出现假阳性。
    ⑧:严控反应时间,反应时间过长,酶失活;反应时间过短,酶结合物不能与血清中的微生物抗原抗体充分结合,生成物结构松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假阴性。

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