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BCA蛋白质定量试剂盒使用说明

BCA蛋白质定量试剂盒实验原理:

碱性条件下,蛋白质分子中的肽键结构能与Cu2+结合生成紫色络合物,同时将Cu2+还原为Cu+。BCA试剂可灵敏特异的与Cu+结合,形成稳定的有颜色的络合物,562nm处有zui高的吸收值,可在540-595nm测定其吸收值,颜色的深浅与蛋白质浓度成正比,与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。

BCA蛋白质定量试剂盒简介:

对不同种类的蛋白质检测的变异系数非常小,快速灵敏,稳定可靠,测定蛋白浓度不受绝大部分样品中化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20, 60, 80。而且在20-2000μg / mL浓度范围内有较好的线性关系。

BCA蛋白质定量试剂盒使用说明:

1。 根据样品数量,按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀。BCA工作液室温下24小时内稳定。

2。 完全溶解蛋白标准品,取C液10微升稀释至100微升,使终浓度为0。5mg/mL。原则上,蛋白样品在什么溶液中,标准品应用什么溶液稀释。但我们强烈建议使用三蒸水稀释标准品及样品。

3. 标准品的稀释:标准曲线的浓度范围应在20-2000μg / mL之间。建议使用倍比稀释法;建议取4~6个不同的浓度做标准曲线;建议每个浓度做2~3个复孔。

4. 蛋白样品的稀释:将待测蛋白样品稀释到标准曲线所能检测的范围内。在eppendorf管中对待测蛋白进行稀释,混匀。可用溶解蛋白的液体进行稀释,但我们建议使用三蒸水稀释标准品。

5. 在96孔板各孔中加入200μL BCA工作液,再在每孔中分别加入已稀释好的标准品和蛋白样品各20μL,建议标准品做2~3个复孔。37℃放置30分钟。 

6. 测定A562nm处的吸光度值,540-595nm之间的波长也可接受。根据标准曲线计算出蛋白浓度。

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