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超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒的操作使用

  1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
  2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。
  3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育1小时。
  4.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
  6.甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
  7.每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育10分钟。避免光照。
  8.取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
  9.在450nm波长处测定各孔的OD值。
 
  1.试剂的选择:选择优良试剂大家都是知道的,但是在检测之前还应该提前半个小时将试剂拿到常温下进行解冻。
  2.加样中可能遇到的问题:在做血清或是血浆用于检测试剂的时候,会碰到血清血浆不好分离的情况,这个时候的解决办法是先放在常温中1到2小时,然后在进行离心处理
  3.洗板时容易造成误差:因为洗板是人工洗的,所以判断什么时候洗干净了也是人为判断的,这个时候带有主观色彩,所以多清洗几次,还有就是在洗的时候孔与孔之间的液体容易交叉流动
  4.显色问题:使用了过期的显色剂或者是显色剂用过后放置时间太长,都有可能造成显色剂不显色。所以在进行显色反应的时候,要先查看显色剂本身的情况
  5.终止反应:在加终止剂的时候由于倾倒速度快,差生气泡,造成假阳性结果。所以在倒终止剂的时候要缓慢倒
  6.读板:读板的时候首先应该保证板的清洁干净。
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